二抗为何只要选对种属即可?

Q1: 二抗既然是一抗的抗体,为什么不像一抗那样要求特异性高?

这涉及到抗体识别抗原的原理和抗体的结构。

比如你要检测的蛋白为A,它有a, b, c三个表位,可以被抗体特异性认识。制作针对a的抗体是将蛋白A的一段,比如包含b+c段,打入兔子(最常见)或其他动物(山羊,大鼠,鸡,仓鼠等),由于这是外来入侵物,动物自身的免疫系统会生产针对它的抗体来清除这个异物,而产生的抗体有些会识别b位点,有些则识别c位点。不用完整的蛋白是因为全长片段通常会太大。然后收集被免疫了的动物的血清,这个含有针对蛋白A的的多克隆抗体就称为抗血清。有的产品卖的直接就是抗血清,有的则再一步将抗体纯化出来。这种多克隆抗体一般价格低一些。

而通过体外刺激小鼠的B细胞和肿瘤细胞的杂合体,进行单克隆培养,可以产生出只针对一个表位的单克隆抗体,即为单抗,单抗的特异性更高,但价格也贵。

但具体到用单抗还是用多抗,则要具体情况具体分析根据它们的适应范围进行选择。如你要测的蛋白浓度很低,用多抗检测到的可能性会比用单抗高。又或者待测蛋白会被加工切割成两段,两段都想被检测到,应该用针对两段表位的多抗。

由此可见,一抗都是特异性针对你要检测的蛋白或者说蛋白表位具有单一性,需求量一般较小

Q2:那么二抗是个什么情况呢?

首先要了解抗体的结构。

 

抗体结构就像一个Y字形,两个丫的部分称为可变区(Fab),正是这个区域特异性地识别抗原的表位。就像一把钥匙配一把锁一样,表位b只被含有b'可变区的抗体识别。而抗体Y字形下面的主干部分称为恒定区(Fc),所有人的抗体的Fc都是一样的,不同的只是Fab区,可以是b',可以是c'。所有鼠的抗体Fc都一样,所有山羊的Fc也都是一样。

二抗制备,就是用一抗的Fc区去免疫动物,方法同制作一抗。注意如果一抗是在兔子上制作的,那么制二抗时就不能再打兔子了,因为兔子不会对自身的Fc产生免疫反应,不然就会产生自身免疫疾病,自己产生抗体攻击自己。自身免疫疾病就是这个原理

话说回来,从兔子中抽出的任意抗体,不一定要一抗(因为所有的Fc都一样),制作只含有Fc段的片段,再打到山羊中,从而获得了针对兔Fc的抗体。这个抗体能够识别所有来自于兔子体内的抗体,不论它们的Fab段是什么。也就是说二抗的适用范围远远大于一抗,因为一抗是一对一(Fab对表位),二抗是一对多(动物2Fab对动物1Fc)。

所以关键在于不是二抗抗一抗不特异,而是二抗抗一抗的恒定区。


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